BioximiaForYou

amylas

Alfa-amylas (diastas, alfa-1,4-glukan-4-glukanhydrolas) tillhör klassen hydrolaser som katalyserar hydrolysen av polysackarider, inklusive stärkelse och glykogen, till dextriner och enkla di- och monosackarider (maltos, glukos).

Amylas i de största koncentrationerna ligger i bukspottkörteln och spottkörtlarna - i form av bukspottskörtel och salivarisoenzymer. Under fysiologiska förhållanden består serumamylas av 40% av pankreatisk amylas och 60% av salivamylas. Genom att använda specifika inhibitorer eller separation genom elektrofores är det möjligt att fastställa ursprunget för enzymet närvarande i plasman. Amylas avlägsnas från plasman genom njurarna och utsöndras i urinen. Detta leder till större informationsinnehåll som bestämmer aktiviteten av alfa-amylas i urinen som ett test som utvärderar funktionell tillstånd i bukspottkörteln. Tillväxten av amylasaktivitet är av största vikt vid diagnos av sjukdomar i bukspottkörteln.

Kliniskt och diagnostiskt värde:

Aktiviteten av blodalfa-amylas och urin varierar kraftigt under dagen.

Hyperamalasemi - en ökning av aktiviteten av amylas i blodserumet.

Ø Akut pankreatit - maximala värden uppträder under de första 6-12 timmarna efter sjukdomsproblemet. Efter denna tid minskar enzymaktiviteten, normaliserar i 2-5 dagar. Om aktiviteten förblir ökad i mer än 5 dagar, indikerar detta en ökning av inflammation.

Ø Förstöring vid kronisk pankreatit

Ø Perforering av duodenalsår

Ø Intestinal obstruktion

Ø Akut appendicit

Ø Alkaloider (morfin, heroin, kodin)

Ø Metanolförgiftning

Ø Stora doser etanol (för alkoholister)

Hypoamylasemi - en minskning av aktiviteten av amylas i blodserum (praktiskt taget har inget diagnostiskt värde).

Ø Pankreatisk nekros

Ø Myokardinfarkt

Hyperamalazuri - ökad utsöndring av amylas i urinen.

Ø Akut pankreatit - En ökning av enzymaktiviteten observeras under de första 24 timmarna av inflammation. Den ökade utsöndringen av enzymet i urinen fortsätter under de kommande 7 till 10 dagarna, trots det faktum att aktiviteten av amylas i blodet efter 3-4 dagar är normalt.

Ø Bukspottkörtelcancer

Ø Perforering av duodenalsår

Ø Gallsten sjukdom

Ø Sjukdomar i spytkörtlarna, parotit, stenar i spyttkanalerna

Hypoamylas - en minskning av frisättningen av amylas i urinen.

Ø Njursjukdom

Ø Leversjukdom

"Bestämning av alfa-amylasaktivitet i biologiska vätskor med den enhetliga Karavey-metoden"

Princip: Under alfa-amylasverkan hydrolyseras stärkelse för att bilda produkter som inte ger färgreaktion med jod. Intensiteten hos minskningen av jod-stärkelsekomplexets färg per tidsenhet är proportionell mot enzymets aktivitet.

Det undersökta materialet: färskt serum, urin.

Satsen innehåller:

Reagens №1 - buffert

Reagens nr 2 - koncentrerat substrat

Reagens №3 - koncentrerad jodlösning

Reagens nr 4 - kaliumfluoridlösning

Reagens nr 5 - saltsyra

Framställning av reagens för analysförfarandet:

Substrat arbetslösning: blanda reagens nr 1 och nr 2 i ett förhållande av 24: 1.

Arbetslösning av jod: blanda destillerat vatten, reagens nr 3 och reagens nr 4 i förhållandet 7: 1: 2.

Arbetslösning av saltsyra: Torka innehållet i flaskans nummer 5 med destillerat vatten 16 gånger.

Bestämningens gång:

reagens

Erfaren prov

Kontrollprov

BioXplorer

amylas

a-Amylas [a- (1,4) -glukan-4-glukanhydrolas, KF 3.2.1.1] är ett enzym som hydrolyserar de interna 1,4 a-glykosidbindningarna av stärkelse, glykogen och andra glukospolymerer. Hos människor är huvudkällorna för a-amylas bukspottkörteln och spytkörtlarna. Många isoformer isolerade från biologiska vätskor och humana vävnader är förmodligen heterogena produkter av posttranslationella förändringar av två familjer av amylas-isoenzymer, vars syntes kodas av två loci hos Atu-1-genen, salivary (C) amylas-typen och Atu-2, pankreatisk (P) typ av enzym, nära besläktad med kromosom 1. Isoenzymerna C och P har inte stora skillnader i aminosyrasammansättning. Två isoformer isolerades genom gelfiltrering på Sephadex i C-amylasfraktionen, varav den ena innehåller kolhydrater. Molekylär massa av kolhydratinnehållande isoformer, 57 kDa, kolhydratfri - 55 kDa. Isoelektriska punkter av huvudisoformerna av C-isoamylaser från 5,5 till 6,5. P-gruppen av isoamylas har en lägre molekylvikt (53 kDa) och innehåller inte kolhydrater. De isoelektriska punkterna för dessa proteiner sträcker sig från 5,7 till 7,0.

Övertygande bevis för att P-typ amylas bildas endast i bukspottkörteln är frånvaron av detta isoenzym hos individer med total pankreathektomi. A-amylas-C-isoenzymet kan däremot syntetiseras i olika organ och vävnader. Hög aktivitet av C-amylas fixeras i äggledarens vävnad och innehållet i äggstockscystret. Den specifika gruppen isoamylaser som produceras av de kvinnliga könsorganens vävnader detekteras inte i serum eller ur hos friska människor. fördelningen av isoamylaser är identisk hos män och kvinnor. Isoamylaser som tillhör C-gruppen finns också i mjölk och sårvätska.

Den kliniska signifikansen att bestämma aktiviteten av amylas i serumet.

Bestämning av serum-a-amylasaktivitet är det vanligaste testet för att diagnostisera akut pankreatit. Vid akut pankreatit ökar enzymaktiviteten i serum 3-12 timmar efter en smärtsam attack, når maximalt efter 20-30 timmar och återgår till normal med en gynnsam kurs inom fyra dagar. Aktiviteten av a-amylas (diastas) i urinen ökar 6-10 timmar efter en ökning av serumaktiviteten och återgår till normalt, oftast tre dagar efter en ökning.

Det är nu allmänt känt att en ökning av den totala aktiviteten av a-amylas inte är specifik för pankreatit och andra sjukdomar i bukspottkörteln. Kliniska studier har visat att en ökning av a-amylasaktivitet inträffar i ett antal sjukdomar, vilket inkluderar tarmobstruktion, gallvägar, blindtarmsbetennande, parotit och ektopisk graviditet. Känsligheten och specificiteten för bestämning av a-amylas vid diagnos av akut pankreatit ökar med förändringar i gränserna för normala värden (den diskriminerande nivån av normen och patologin är en aktivitet som är 1,5-2 gånger högre än normens övre gränser). I detta fall är bestämningen av a-amylasaktivitet den mest informativa den första dagen av utvecklingen av akut pankreatit. Enligt vissa författare har bestämningen av serum-a-amylasaktivitet vid kronisk pankreatit inget diagnostiskt värde.

Hos människor, absorberar a-amylas, som passerar fritt genom filtreringsbarriären hos njurkropparna, epitelcellerna i njurtubulerna på samma sätt som andra serummolekylära serumproteiner. En ökning av serumamylasaktiviteten kan orsakas av försämrad enzymeliminering. Ett exempel är ett tillstånd som kallas makroamylasemi, när ett enzym är bundet till serumimmunoglobuliner och bildar ett makromolekylärt komplex. Ett sådant komplex filtreras inte in i urinen och kan inte avlägsnas med användning av några andra mekanismer, vilket leder till en signifikant och ibland långvarig ökning av a-amylasens aktivitet i blodserumet. Makroamylasemi förekommer hos friska personer med en frekvens på 1%, hos personer med hyperamylasemi med en frekvens på 2,5%. Makroamylasemi kan diagnostiseras med hjälp av ultracentrifugeringsmetoden, EF, gelkromatografi, ett enkelt test av utfällningen av komplexet med polyetylenglykol har också föreslagits.

Serum-a-amylasaktiviteten ökar ofta vid njurinsufficiens, men det är inte helt klart vad som orsakar denna ökning - en ökning av bildandet av ett enzym eller en minskning av elimineringen. I sådana fall kan ytterligare information ges genom att bestämma hastigheten av a-amylasutsöndring eller beräkningen av enzymavstånd.

Enligt många författare är det mest känsliga och specifika testet för diagnos av pankreatit aktivitetsnivån för P-isoenzym-a-amylas. Detta test är av särskild betydelse om en normal övergripande amylasaktivitet finns i en patient med en presumptiv diagnos av pankreatit. Genom minskad P-amylasaktivitet kan kronisk pankreatit diagnostiseras. Andelen P-isoamylas i den totala aktiviteten av a-amylas är signifikant högre i urinen än i serum, eventuellt på grund av skillnader i utsöndring av isoenzymer från njurarna. Trots det är det diagnostiska värdet att bestämma aktiviteten för a-amylasisoenzymer i urinen sämre än i blodet.

Experiment - den grundläggande metoden för vetenskap
Både observation och mätning ingår i en så komplicerad grundläggande metod för vetenskap som experiment. I motsats till observation kännetecknas ett experiment av en forskares ingripande i de objekt som studeras, genom aktiv inverkan på ämnet.

Jord är en unik del av biosfären
I slutet av 1800-talet. V. Dokuchaev, den stora ryska naturforskaren, konstaterade genom sina studier av chernozem och andra jordar i den ryska dalen och Kaukasus att jordar är naturliga kroppar i sina yttre egenskaper och krafts egenskaper.

Urinanalys
Urinalys är en serie kemiska och fysiska test, vars resultat visar provets specifika gravitation och pH och närvaron och nivån av blod, glukos och andra komponenter i provet. Sedan de grundläggande uppgifterna vid kroniskt njursvikt och får.

amylas

a - Amylas (diastas, 1,4-a-D-glukanhydrolas, EC 3.2.1.1.) katalyserar hydrolysen av a-1,4-glukosidbindningar av stärkelse, glykogen och deras besläktade polysackarider till maltos, dextriner och andra polymerer. Enzymets molekylmassa är ca 48 000 D. Molekylen innehåller en kalciumatom som inte bara aktiverar enzymet utan också skyddar den från proteasernas verkan, och amylasaktiviteten ökar med påverkan av klorjoner. I blodet representeras två isoenzymer: bukspottkörteln - P-typ och spytt - S-typ, som var och en är indelad i flera fraktioner. S-typen isoenzym är i allmänhet 45-70% (i genomsnitt 57%), resten är i P-typen. Båda isoenzymerna har nästan identiska katalytiska och immunologiska egenskaper, skiljer sig något i elektroforetisk rörlighet, men separeras väl genom gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Det finns också makroamylas, som inte utsöndras av njurarna, men kan hittas i normalt blodserum (cirka 1% friska människor) och patologi (2,5%).

Hög amylasaktivitet observeras i parotid och bukspottkörteln. Däremot finns dess aktivitet, även om den är mycket lägre, i stora och tunna tarmar, skelettmuskler, lever, njurar, lungor, äggledarrör, fettvävnad. I blodet är enzymet associerat med både plasmaproteiner och bildade element. Enzymaktiviteten är densamma för män och kvinnor och beror inte på vilken typ av mat som tas och tidpunkten för dagen.

Befintliga metoder för att studera a-amylasaktiviteten i biologiska vätskor är indelade i två stora grupper:

1. Sackariserande (reduktometrisk), baserat på studien av sockerarterna bildade av stärkelse genom den reducerande effekten av glukos och maltos.

2. Amyloklastisk, baserat på bestämning av resten av obruten stärkelse:

• enligt intensitetsgraden av dess reaktion med jod. Dessa metoder är mer känsliga och specifika, men deras noggrannhet beror till stor del på stärkelsens kvalitet och optimering av bestämningsförhållandena.
• viskositetssuspension av stärkelse, har inte hög noggrannhet och används inte nu.

3. Metoder som använder kromogena substrat - baseras på användningen av substrat-färgämneskomplex, vilka under a-amylasens verkan sönderdelas för att bilda ett vattenlösligt färgämne.

4. Metoder baserade på kopplade enzymatiska reaktioner:

Stärkelse + H₂Om Maltos + Maltotrios + Dextrin

Maltos + N₂Ca 2 Glukos

Glukos + ATP Glukos - 6 - F + ATP

Glukos-6-F + NADF-glukonat-6-F + NADFN

Aktiviteten hos enzymet bestäms av ackumuleringshastigheten för NADPH.

Två amyloklastiska metoder godkändes som förenade: Karavey (med resistent stärkelsubstrat) och Smith-Rohe.

Bestämning av amylasaktivitet med färgad
substrat för rekryteringsföretaget "Lachema"

principen

a - Amylas katalyserar hydrolysen av ett olösligt färgat stärkelsubstrat för att bilda ett blått vattenlösligt färgämne. Mängden utsläppt färgämne är proportionellt mot enzymets katalytiska aktivitet.

Bestämning av alfa-amylasaktivitet.

Alfa-amylas (diastas) är ett enzym som utför hydrolytisk klyvning av polysackarider till dextrin, maltos och glukos. De slutliga produkterna av amylas ger inte en färgreaktion med jod. Bukspottskörtel och spottkörtlar är rikaste i amylas. Amylas utsöndras i blodet huvudsakligen från dessa organ.

Mänsklig blodplasma innehåller huvudsakligen två typer av amylas: pankreas och spottkörtel, den tredje typen amylas är stor eller makroamylas. Med urin utsöndras pankreasamylas huvudsakligen, vilket är en av anledningarna till att bestämningen av urinamylas är mer informativ än i blodet för att bedöma funktionell tillstånd i bukspottkörteln. Det antas att 65% av urinamylasaktiviteten beror på bukspottkörtelamylas, medan 60% av den serumamylolytiska aktiviteten tillhandahålls av salivarkörtlarnas amylas. Vid akut pankreatit ökar pankreatisk amylas i serum till 89% och i urin till 92% utan att ändra salivamylasindex.

Aktiviteten av amylas i blodet och urinen genomgår signifikanta förändringar under hela dagen, såväl som individuella skillnader noteras. Fluktuationer av amylasaktivitet kräver att den studeras i den dagliga urinen för att bedöma pankreasfunktionen.

Befintliga metoder för bestämning av a-amylasaktiviteten är uppdelade i 2 grupper:

1. Slutpunktsmetoden är baserad på att bestämma resten av osmält stärkelse enligt intensitetsgraden av dess reaktion med jod (Karavey-metoden).

2. Den kinetiska metoden.

serum a-amylas - 16-30 g / h * l

urin-a-amylas - 28-160 g / h * l

1. Serum ska inte hemolyseras.

2. Förhållandena i försöket är av stor betydelse, i synnerhet den exakta inkubationstiden på 5 minuter, så det rekommenderas inte att genomföra en samtidig studie av mer än 5 sera.

3. Bestämning av aktiviteten av a-amylas i urinen utförs på samma sätt som bestämningen i blodet, men vid hyperamylas rekommenderas det att späda urinen med efterföljande omräkning.

4. A-amylasaktiviteten påverkas av läkemedel - antibiotika, smärtstillande medel och även alkohol.

En ökning av amylasaktiviteten uppträder huvudsakligen i sjukdomar i bukspottkörteln.

Vid akut pankreatit ökar enzymets aktivitet i blodet och urinen mer än 10 gånger. Hyperamalasemi inträffar omedelbart efter sjukdomsuppkomsten, når maximalt 12-24 timmar, varefter enzymaktiviteten snabbt minskar och kommer normalt i 2-6 dagar. Vanligtvis varar hypramilazuri längre än ökningen av enzymaktiviteten i serumet, därför är det mer informativt i 2-3 dagar efter en smärtsam attack att bestämma aktiviteten av a-amylas i urinen.

I kronisk pankreatit, bukspottkörtelcancer är ökningen av enzymaktivitet inte så signifikant. Dessutom kan det finnas en liten ökning av enzymaktiviteten hos sjukdomar som åtföljs av en liknande klinisk bild med akut pankreatit: akut blindtarmsbetennande, peritonit, perforerat magsår etc.

Därför tillåter uttalad amylasemi att skilja akut pankreatit från kroniska sjukdomar i bukspottkörteln, liksom från andra akuta sjukdomar i bukhålan.

Nästan alltid amylasemi åtföljs av amylazuria. Men bestämningen av urinamylasaktivitet är en mindre noggrann diagnostisk indikator, eftersom frisättningen av amylas i urinen är associerad med njurefunktion. En liten ökning av amylas i blodet samtidigt som nivån i urinen minskar kan förklaras av en kränkning av njurfunktionen.

En minskning av amylasaktivitet observeras med nekros av bukspottkörteln, leversjukdomar (hepatit, cirros), omfattande brännskador, diabetes mellitus, kakexi etc.

194.48.155.252 © studopedia.ru är inte författaren till de material som publiceras. Men ger möjlighet till fri användning. Finns det upphovsrättsintrång? Skriv till oss | Kontakta oss.

Inaktivera adBlock!
och uppdatera sidan (F5)
mycket nödvändigt

Amylasbestämning i biologiska vätskor

Amylas i blodet och vad är nivån på denna indikator är normal

• Vad är detta enzym
• Metoder för bestämning
• norm
• Skälen till ökningen
• låg avläsning

En av de viktiga komponenterna i den biokemiska analysen av blod är studien av dess enzymatiska aktivitet. Detta bestämmer plasmakoncentrationen av olika enzymer, vilka huvudsakligen produceras av vissa organ. Denna typ av specificitet gör att de kan användas som diagnostiska kriterier för ett smalt spektrum av sjukdomar. I denna artikel kommer vi att diskutera en sådan indikator som amylasfrekvensen, som hänvisar till specifika markörer av pankreatisk patologi.

Vad är detta enzym

I många år kämpar vi framgångsrikt med högt blodtryck?

Institutets chef: "Du kommer att bli förvånad över hur lätt det är att bota högt blodtryck genom att ta det varje dag.

Alfa-amylas anses vara en av enzymerna av bukspottkörteljuice (bukspottkörtel), som är aktivt involverad i matsmältningen. Det produceras av exocrina celler och genom utsöndringskanalerna går in i duodenum, där det är ansvarigt för uppdelning av komplexa kolhydratkomponenter till enklare. De är inblandade i nedbrytningen av glykogen och stärkelse. Slutresultatet av deras åtgärder bör vara produktionen av enkel glukos, som konsumeras av kroppen för att återbetala energibehovet hos cellerna.

Men amylas bör flöda uteslutande i tarmlumen. Normalt går en liten del av den systemiska cirkulationen, eftersom varje cell i processen med vital aktivitet har direkt kontakt med blodet. Så länge som pankreascellernas integritet inte bryts, överskrider enzymets koncentration inte de normala gränserna. Blodamylas på grund av sin höga enzymatiska aktivitet, som påverkar kroppens vävnader, kan orsaka deras förstörelse. Därför bör kvantiteten bibehållas på en konstant nivå.

För behandling av högt blodtryck använder våra läsare framgångsrikt ReCardio. Med tanke på populariteten av det här verktyget bestämde vi oss för att erbjuda det till er uppmärksamhet.
Läs mer här...

Metoder och analyser för bestämning av blodamylasaktivitet

Amylas i blodet cirkulerar på detta sätt: enzymet utsöndras av glandulära pankreasceller, går in i blodet och transporteras till alla kärl. I levern neutraliseras den delvis. Den delen av enzymet, som inte har tid att kollapsa, passerar genom njurfiltret, där det koncentreras och utsöndras i urinen. Denna mekanism är grunden för bestämning av koncentrationen av alfa-amylas i olika biologiska fluider.

De viktigaste analyserna är:

• Biokemisk analys för att bestämma blodalfa-amylas;
• Biokemisk analys av urin för bestämning av urinamylas (analys av diastas).

I klinisk praxis används den andra metoden ofta, eftersom det är tekniskt mycket lättare att utföra och inte kräver blodprovtagning. Dessutom är det mer känsligt och specifikt. I en stabilt stor volym blod och extracellulär vätska är enzymet i ett mer utspänt tillstånd än i en liten mängd urin. Därför är amylasaktiviteten hos urin flera gånger högre än blodplasma.

Normal prestanda

Utvärdering av analysresultaten, de borde jämföras med vissa standarder. Det är viktigt att överväga att normen innebär en bedömning i vissa måttenheter. Var därför noga med att uppmärksamma de tecken som listas efter siffrorna i kolumnen av analysresultat. Dessutom kan amylashastigheten, som bestäms i olika laboratorier, skilja sig beroende på användningen av reagens med olika känslighet. Vanligtvis indikeras hastigheten av laboratoriet bredvid resultatet.

De allmänt accepterade standardindikatorerna för diastas och alfa-amylas i tabellen.

Biochemistry, som bestämmer blodets amylasaktivitet, kännetecknas av att amylasfrekvensen hos kvinnor och män är identisk. Könshormoner har ingen signifikant effekt på detta enzym.

Orsaker och mekanismer för att öka indikatorn

Den rätta tolkningen av resultaten av analyser för att bestämma koncentrationen av amylas i plasma eller urin kan verkligen hjälpa till vid diagnos av ett antal sjukdomar. I klinisk praxis är de vanligast förekommande situationerna där amylas eller diastas är förhöjda. Detta visar vad som händer:

• Ökad sekretorisk aktivitet i bukspottkörteln;
• Förekomsten av hinder i bukspottkörteln eller deras kompression, vilket komplicerar utflödet av amfibas
• Bekymring av bukspottskörtelvävnad är en traumatisk, inflammatorisk, nekrotisk (destruktiv) eller neoplastisk process.

Därför hänvisar en ökning av blodalfa-amylas och urindiastas till specifika markörer för sådana sjukdomar i bukspottkörteln och dess kanaler:

1. Med förhöjning av kronisk pankreatit
2. Med akut pankreatit, bröstkorgskörtelnekros (självförstöring av körtelvävnad genom enzymer), peripankreatisk infiltration eller i de inledande stadierna av allvarlig pankreatisk nekros
3. Bukspottkörtelcancer. Amylasfrekvensen överskrids i större utsträckning när tumören är belägen i organets huvud och kropp;
4. Olika typer av kolelithiasis med koledokolithiasis (migration av stenar i gallkanalerna);
5. Nederlaget för duodenumets stora duodenaltarm i form av stenotisk papillit, kilade stenar och cancer tumörer.

Ökad amylasaktivitet vid andra sjukdomar och tillstånd

Ibland måste du möta situationer där det inte finns några uppenbara problem med bukspottkörteln, men indikatorerna för alfa-amylas och diastas går utöver det normala intervallet. Det betyder att det finns:

• Fel i kosten;
• Användningen av alkoholhaltiga drycker;
• Förstöring av kronisk cholecystit och inflammatorisk process i levern;
• Ektopisk graviditet
• Inflammatoriska destruktiva sjukdomar i bukenorganen (perforerat sår, appendicit, peritonit, tarmobstruktion och andra);
• Virala infektioner åtföljda av polyglandulit (flera inflammatoriska förändringar i nästan alla spottkörteln och bukspottkörteln). Det händer med parotit, cytomegali och Epstein-Barr virusinfektion.

låg avläsning

Dekryptering av test, vilket resulterar i en minskning av blodets amylasaktivitet, krävs sällan. Men fortfarande, ibland måste du möta det. Detta är möjligt med:

• Komplett eller nästan fullständig förstöring av bukspottkörteln som ett resultat av bukspottskörtelnekros
• Cancer transformation av majoriteten av bukspottkörteln, där det finns praktiskt taget inga normala celler med bevarade funktionella förmågor;
• Avlägsnande av hela eller subtotala resektion av bukspottkörteln;
• Genetiska störningar av enzymaktiviteten i kroppen (cystisk fibros).

Nivån av amylas i blodet och urin diastas är ett pålitligt flaggskepp som indikerar riktningen av den diagnostiska vägen för sjukdomar i bukspottkörteln. Korrekt bedömning av test i kombination med jämförelse av resultaten från andra typer av forskning lämnar liten chans att ett antal sjukdomar går obemärkt.

Kliniskt och diagnostiskt värde för bestämning av alfa-amylasaktiviteten

I blod och urin

Aktiviteten av blodalfa-amylas och urin under dagen (såväl som från en dag till en annan) varierar signifikant. Dessutom observerades signifikanta individuella skillnader mellan dessa indikatorer hos patienterna utan matsmältningsorganens patologi. Med tanke på fluktuationerna i utsöndringen av alfa-amylas i urinen rekommenderas att undersöka enzymets aktivitet i urinen samlad per dag.

Förändringar i alfa-amylasaktiviteten i blodet och urinen uppträder under graviditeten. Hyperamylasemia. Aktiviteten av alfa-amylas ökar signifikant med sjukdomar i bukspottkörteln. Vid akut pankreatit ökar enzymets aktivitet i blodet och urinen 10-40 gånger. Hyperamylasemi uppträder vid sjukdomsuppkomsten, når maximalt 12-24 timmar efter utveckling, minskar sedan snabbt och kommer till en norm med 2-6 dagar.

Aktiviteten hos enzymet kan ökas i ett antal sjukdomar som har en liknande klinisk bild med akut pankreatit, nämligen: akut blindtarmsbetennande, peritonit och perforerat mag- och duodenalsår. Hos patienter med peritonit är en ökning av amylasaktiviteten en följd av utvecklingen av amylasbildande bakterier. Vanligtvis ökar enzymets aktivitet vid dessa patologiska förhållanden med 3-5 gånger.

Av sjukdomar som orsakar relativt obetydlig hyperamylasemia icke-pankreatiskt ursprung (dvs utan direkt förstörelse av pankreas själv) inkluderar kolecystit, kolelitiasis, ett tillstånd associerat med bristning av gallblåsan, njursjukdomar, njursvikt, metastas av cancer till lungorna, spottkörtel lesion med obturation av deras kanaler (tydlig klinisk bild av parotit gör det lätt att förklara hyperamylasemi), prostatit, traumatisk hjärnskada, traumatisk chock, brännskador, lunginflammation, diabetisk ketoacidos, abort, postoperativ period.

Aktiviteten hos alfa-amylas i serum förbättras också i esofagus perforering, magsår, gastrit, akut tarmobstruktion, myokardischemi, och tunntarmen, peritonit, rörbrott vid ektopisk graviditet, salpingit, aortaaneurysm.

De främsta orsakerna till hyperamylasemi är: försämrad utsöndring från körtlar (alfa-amylasproducenter), ökad permeabilitet hos den histohematogena barriären i körtlarna, vävnadsnekros, försämrad enzymfrisättning genom njurfiltret.

Hyperamylasemia orsaka flera andra hormoner och många läkemedel som huvudsakligen innebär att leda till en minskning av ringmuskel av Oddi: adrenalin, histamin, sekretin, furosemid, salicylater, antikoagulantia, morfin, pantopon, opium, kodein, tetracyklin, liksom alkohol.

Trots det faktum att hyperamylasemi nästan alltid åtföljs av peramylazuri, kan bestämningen av urin-alfa-amylasaktivitet inte alltid vara en korrekt diagnostisk indikator, eftersom frisättningen av amylas i urinen är förknippad med njurefunktionen. Dessutom utsöndrar njurarna endast 24% av det amylas som utsöndras av matsmältningskörtlarna från blodet.

Studien av alfa-amylasaktivitet i daglig urin är ett mer tillförlitligt biokemiskt test för att upptäcka en sjukdom i bukspottkörteln än en studie baserad på att analysera en enda del av den. Efter aktiviteten av blodalfa-amylas efter en attack av pankreatit återgår till normal, kan den förbli förhöjd i urinen i upp till 7 dagar.

Koefficienten "blodalfa-amylasaktivitet / urin alfa-amylasaktivitet" är en indikator på det funktionella nyttan av njurfiltret.

Hypoamylamin i klinisk praxis är sällsynt. Det noteras i patienter med leversjukdom (hepatit, cirros), cancer (speciellt i närvaro av levermetastaser), omfattande brännskador, hud, diabetes mellitus, hypotyreos, gemensamma ätstörningar, i en nedgång i kroppsvikt, kakexi, samt under påverkan av berusning ( till exempel vid toxicos hos gravida kvinnor). En minskning av alfa-amylasaktiviteten indikerar oftast insufficiensen av subkatarrens exokrina funktion. Införande av citrater och oxalater leder till en minskning av enzymaktiviteten.

Bestämning av total laktatdehydrogenasaktivitet

Laktatdehydrogenas (L-laktat, NAD-oxidoreduktas, EC 1.1.1.27) - glykolytiska (cytosoliskt Zn-innehållande) enzym (molekylvikt 135 tusen D) katalyserar reversibelt oxidationen av L-laktat till pyrodruvsyra. En oumbärlig deltagare i denna reaktion är en oxiderad nikotinadeninduukleotid, som används som en kofaktor för enzymet som spelar rollen som en väteacceptor.

Reaktionen katalyserad av laktatdehydrogenas kan representeras enligt följande:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktatdehydrogenas SNSSOSOO '+ ÖVER • H + H +

Enzymet är allmänt fördelat på människor. Enligt grad av minskning av enzymaktivitet kan organ och vävnader ordnas i följande ordning: njurar, hjärtan, skelettmuskler, bukspottkörtel, mjälte, lever, lungor, blodserum. I det senare har flera olika proteiner (isoenzymer) visat sig ha de enzymatiska katalytiska egenskaperna. Ändringar i strukturen av proteindelen av isoenzymerna bestämmer deras olika fysikalisk-kemiska egenskaper (i synnerhet annan elektroforetisk rörlighet i agar, stärkelse, polyakrylamid och andra geler).

I plasma (serum) av blod identifierades fem laktatdehydrogeaza-isoenzymer - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - som ligger i gelén i minskande ordning av deras elektroforetiska rörlighet.

Var och en av isoenzymerna är en tetramer bildad av subenheterna H och M. Det har visat sig att LDH1-fraktionen härrör huvudsakligen från hjärnans vävnad, LDH5 - från levern. LDH i cytoplasma av celler och serum representeras av 5 isoenzymer.

M-subenheten finns huvudsakligen i vävnader med anaerob metabolism, medan H-subenheten är närvarande i vävnader med en övervägande av aeroba processer. Metoden för elektrofores på bärare hjälper till att dela upp alla 5 LDH-isoenzymer, vilka representerar följande procentandel i blodserum hos friska människor: LDH; (14-26%), LDH ^ (29-39%), LDHs (20-26%), LDH4 (8-16%), LDHs (6-16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktat dehydrogenas ingår inte bara i plasma utan också i signifikanta mängder i röda blodkroppar, så det serum som används för analysen måste vara friskt utan någon hemolys.

Metoder för att bestämma LDH: s totala aktivitet är uppdelade i två huvudgrupper: 1) Kinetisk baserat på Warbur-optiskt test (optisk effekt associerad med omvandlingen av NAD till NAD • N och vice versa) och 2) Metoder som bestämmer mängden produkt som bildas eller konsumerat substrat efter en fast inkubationsperiod (slutpunktsmetoder).

Arbetsnummer nr. 32 Colorimetrisk dinitrofenylhydrazinmetod för att bestämma aktiviteten av laktatdehydrogenas i blodserum (enligt Sevel och Tovarek)

Principen för metoden. L-laktat i en alkalisk medium i närvaro av serum LDH och tillsatt NAD oxideras till pyruvat. Enligt graden av dess bildning och bedöms på enzymets aktivitet.

reagens

1. 0,45 mol / 1 lösning av natrium-mjölksyra. Mätkolv 100 ml införa 5 ml mjölksyrakoncentration av 800 g / l 10 ml iyi mjölksyrakoncentration av 400 g / I och den neutraliseras med 2 N natriumhydroxidlösning till en svagt alkalisk reaktion med ett pH av 7,5 (vid användning av fenolftalein måste utvecklas svagt rosa färg). Volymer bringas till märket med destillerat vatten.

2. 0,03 mol / 1 lösning av natriumpyrofosfat, pH 8,8. I en volymkolv med en kapacitet på 500 ml bidrar 6,69 g Na₂ P₂O₅ • N₂Ca 50 ml dieter av utspätt vatten blandas blandningen grundligt och lösningens pH justeras till 8,8 med 1 N HCl-lösning. Volymen av innehållet i kolven justeras till märket med destillerat vatten. Reagenset är stabilt i en månad när det förvaras i kylskåpet.

3. Lösning NAD. 3 mg NAD (kemiskt ren) löses i 1 ml destillerat vatten (med en hastighet av 0,6 mg per prov). Reagenset är stabilt i 4 veckor när det förvaras i kylskåp.

4. En lösning av 2,4-dinitrofenylhydrazin. 19,8 mg 2,4-dinitrofenylhydrazin löses i en liten volym IN saltsyralösning genom upphettning av blandningen i ett vattenbad. Efter kylning justeras volymen till 1 ml med 1 N saltsyra. Nästa dag filtreras reagenset. Lösningen lagras i en skål med mörkt glas, det kan användas i ett år.

5. 0,4 n natriumhydroxidlösning.

6. 1 n saltsyra lösning.

7. Standardlösning av pyruvsyra-natrium. 11 mg kristallin natriumpyruvsyra löses i en liten mängd destillerat vatten, överförs till en 100 ml måttkolv, och volymen av lösningen görs upp till märket med destillerat vatten. 1 ml lösning innehåller 110 μg natriumpyruvat, vilket motsvarar 88 μg pyruvsyra. Arbetsstandardlösningen framställs genom att spädning av huvudet 10 gånger med destillerat vatten. I 1 ml av en arbetslösning av 8,8 μg pyruvsyra.

Förloppsförloppet. 0,1 ml serum utspädd 1: 2 blandas med 0,3 ml NAD-lösning och upphettas i 5 minuter vid 37 ° C. Därefter upphettas 0,8 ml fosforsyrauppvärmningslösning och 0,2 ml natrium-mjölksyra-lösning, som tidigare upphettats till 37 ° C Blandningen inkuberas vid 37 ° C i 15 minuter. Efter inkubering fylls provet med 0,5 ml 2,4-dinitofenylhydrazin och hålls vid rumstemperatur i 20 minuter. Sedan tillsätt 5 ml natriumhydroxidlösning, blanda innehållet i röret och efter 10 minuter

Absorptionen mäts i våglängdsområdet 500-560 nm, exempelvis vid en PEC med ett grönt ljusfilter i en kyvett med en skikttjocklek av 10 mm. Notera provets optiska densitet, med hänsyn till absorptionskontrollen.

Kontrollprovet sätts på samma sätt som experimentet, men utspädd 1: 2 serum tillsättes efter inkubering av blandningen. Beräkna enzymets aktivitet enligt kalibreringsgrafen. Aktiviteten av laktatdehydrogenas uttrycks i mmol pyruvsyra, vilken bildas genom att inkubera 1 1 serum i 1 h vid 37 ° C.

För att få data att bygga ett kalibreringsdiagram måste du göra följande. Utarbeta en serie utspädningar från en arbetsstandardlösning av natriumpyruvsyra (tabell 2). Häll sedan 0,5 ml lösning av 2,4-dinitrofenylhydrazin i rör. Därefter bearbeta standardprover på samma sätt som erfarna.

När man placerar kontrollprovet, tillsätt 0,6 ml destillerat vatten, 0,8 ml pyrofosfatlösningen och 0,5 ml 2,4-dinitrofenylhydrazinlösningen till röret. Därefter behandlas provet på liknande sätt erfarna.

För att hitta indikatorer för laktatdehydrogenasaktivitet i dimensionen "mmol pyruvsyra per 1 liter serum per 1 timmes inkubering vid 37 ° C" multipliceras antalet μmol pyruvsyra i standardprovet med en faktor 120 eller mängden μg pyruvinsyra - med 1,41.

För att uttrycka enzymets aktivitet i enheter i den nya dimensionen kan du använda en annan formel:

Laktat dehydrogenasaktivitet i mmol / (h • l) = C • 120: 88,

där C är mängden μg pyruvsyra i provet, 120 är omvandlingsfaktorn av μg pyruvinsyra i mg, 88 är faktorn för att omvandla indikatorer från mg till mmol.

När man konstruerar ett kalibreringsdiagram på abscissaaxeln uttrycks enzymaktivitetsvärdena uttryckta i dimensioner, mmol DCH • 1) och presenteras i den sista kolumnen i tabell 33. Ett linjärt förhållande mellan koncentrationen av pyruvsyra och optisk densitet är från 0 till 10 mmol / (h) l).

Kliniskt och diagnostiskt värde för bestämning av amylasaktivitet

Amylas är ett enzym som bryter ner stärkelse och glykogen. bukspottkörteln och salivarkörtlarna är de rikaste. Serumamylasinnehållet är associerat med matintag: under dagen är aktiviteten högre än på natten.

Aktiviteten av amylas i serum ökar (hyperamylasemi) med:

Akut pankreatit (10-30 gånger, som kommer normalt i 6-7 dagar, om aktiviteten förblir ökad i mer än 5 dagar, detta indikerar utvecklingen av en kronisk process);

Förstöring av kronisk pankreatit

Parotit (inflammation i spytkörtlarna);

Kan orsakas av alkohol, adrenalin, droger.

En minskning av aktiviteten av amylas i serum (hypoamylasemi) observeras när:

Leversjukdomar (hepatit, obstruktiv gulsot, cirros);

Ökad aktivitet i urinen (hyperamlas) observeras när:

Akut pankreatit (har ett större diagnostiskt värde än definitionen i serum, eftersom den varar mer än 7 dagar);

Minskningen av enzymaktivitet i urinen (hypoamylas) observeras när:

Svara på frågorna:

Namn på lokaliseringsstället, det optimala pH-värdet och det biologiska värdet av amylas.

Skriv den reaktion som amylas katalyserar.

Vilken klass av enzymer amylas?

* Vilka är de viktigaste sjukdomarna som kännetecknas av ökad aktivitet av amylas. Förklara orsaken.

* Berätta om orsakerna, typerna, laboratoriediagnosen och förebyggandet av pankreatit.

3,8. Praktiskt arbete "Bestämning av serumaminotransferasaktivitet".

Målen för praktisk arbete:

att studera det kliniska och diagnostiska värdet för bestämning av serumaminotransferaser;

Lär dig att bestämma aktiviteten av aminotransferaser i serumet.

Uppgifter för självständigt arbete:

Skriv i en anteckningsbok principen och metodiken för det praktiska arbetet.

Utrusta en arbetsplats för praktisk arbete.

Gör praktiskt arbete.

Gör nödvändiga beräkningar.

Fyll i analysformuläret. Betygsätt resultaten.

Gör en slutsats om arbetet och ritningarna.

Besvara ytterligare frågor.

Som ett resultat av transaminering, som uppträder under verkan av AsAT och AlAT, bildas oxaloättiksyra och pyrodruvsyror. När en lösning av 2,4-dinitrofenylhydrazin tillsättes, stannar den enzymatiska processen och pyruvsyrahydrazoner uppträder. I en alkalisk medium ger de färgning, vars intensitet är proportionell mot mängden pyruvsyra som bildas.

1. Referenslösning natriumpyrodruvsyra - 2 mmol / l.

2,4-dinitrofenylhydrazin - 1 mmol / l.

3. Natriumhydroxid - 0,4 n..

4. Substrat AsAT / Alat.

2. FEC, kyvetter per cm.

4. Provrörstativ.

5. Pipetter för 1 och 5 ml.

Genomföra en studie av aktiviteten av aminotransferaser i serum enligt tabellen.

Diagnostiskt värde för bestämning av serumamylasaktivitet

Hos människor utsöndras alfa-amylas av bukspottkörteln och spottkörtlarna, dess små aktivitet finns i vävnaderna i lever- och skelettmusklerna. Molekylmassan av alfa-amylas är relativt låg, till skillnad från de flesta enzymer filtreras den i njurarnas glomeruli och ingår i urinen. Alfa-amylas består av två isoenzymer: bukspottskörtel (P-typ) och spytt (S-typ). Hos friska personer står serum för cirka 70% av den amylolytiska aktiviteten i salivarisoenzymet; i urinen är ungefär samma andel pankreatisk isoamylas.

Hyperamilasemi och hyperamalazuri uppmärksammas hos många sjukdomar, men är mest uttalade vid akut pankreatit, där aktiviteten ökar huvudsakligen (upp till 90% eller mer) på grund av bukspottkörtelisoenzymet. Med denna sjukdom noterades den högsta mängden amylas i blodet och urinen under de första 1-3 dagarna. Viral hepatit och bukspottkörtelcancer orsakar också bukspottkörtel hyperamilazuri i bukspottskörtelns ursprung.

Vid icke-pankreatisk hyperamylasemi ingår skador på spytkörteln, njursvikt. Skälen till ökningen av b-amylas i blodet är nedsatt sekretion av körtlar som innehåller b-amylas, brist på njurutskiljning av amylas från kroppen.

Många farmakologiska ämnen, kortikosteroider, salicylater, tetracyklin, furosemid, histamin orsakar hyperamalasemi. För b-amylas kännetecknas blod av brett intra- och interindividuella variationer. Den mest informativa är definitionen av pankreatisk isoamylas.

Förändringen av aktiviteten av alfa-amylas i patologi.

Bestämningen av alfa-amylasaktivitet förvärvar kliniskt och diagnostiskt värde vid diagnos och övervakning av bukspottkörtelns sjukdomar, matsmältningssystemet, skador på bukhålets organ. I vissa fall (till exempel i sjukdomar i bukspottkörteln) är aktiviteten av endast ett isoenzym, pankreas alfa-amylas, av diagnostisk betydelse; Vid övervakning av sjukdomar i matsmältningsorganet är det nödvändigt att jämföra enzymaktiviteten i serum (sekretorisk aktivitet och ytterligare absorption från bukhålan) och urin (ofta är amylazurihalten stabilare och långvarig indikator än amylasemi).

Förhöjda alfa-amylasaktivitetsvärden observeras med:

Inflammatoriska pankreasjukdomar (akut, svullnad, kronisk, reaktiv pankreatit). Hyperamylasemi är vanligtvis akut (10-40 gånger högre), men ofta kortlivat hyperamylas är också signifikant, men nivån av alfa-amylas i urinen minskar mycket långsammare än i blodplasma (serum). Denna egenskap är lämplig att använda när "sen" diagnostisk undersökning av en patient med kliniska tecken på pankreatit. För att övervaka processen är enzymaktiviteten vanligen uppmätt i båda biologiska vätskor. Det bör noteras att svåra former av pankreasskador med hotet av vävnadsnekros samt pankreatit tillsammans med allvarliga sjukdomar i lipidmetabolism kan åtföljas av en verklig eller falsk (på grund av amylasinhibering av triacylglycerider) minskning av enzymaktiviteten. Om någon form av pankreatit misstänks är det därför diagnostiskt viktigt att inte bara bestämma alfa-amylasaktiviteten i urinen och serumet utan också att beräkna amylazo-kreatininclearance med formeln:

Vid akut pankreatit överstiger detta beräknade värde 6%. Beräkning av clearance gör att du inte kan korrigera volymen och tiden för urinuppsamlingen och gör resultatet mindre beroende av de använda metoderna för bestämning.

Sjukdomar i bukhålan, med liknande symptom med akut pankreatit: akut blindtarmsbetennande, peritonit, perforerat magsår och duodenalsår. Alfa-amylasaktiviteten ökar med ca 3-5, sällan 10 gånger, huvudårsaken till hyperemiasemi är inte så mycket ökad utsöndring av enzymet, som dess sekundära absorption från bukorganen in i blodet. För att differentiera diagnosen utförs bestämningen av alfa-amylas och kreatinin i urinen och beräkningen av kreatininclearance med användning av ovanstående formel. Med ett konstant värde av clearance från 1 till 4%, bör det misstänkas sjukdomar i bukorganen, masquerading som akut pankreatit.

Av samma anledning ökar alfa-amylasaktiviteten signifikant med esofagalperforering, gastrit, akut intestinalt obstruktion, ischemi och tunntarmsinfarkt, tubalbrott, salpingit, aorta-aneurysm.

Vid sjukdomar i inre organ som inte är direkt kopplade till matsmältningssystemet är en måttlig ökning av aktiviteten av totalt alfa-amylas och / eller dess isoenzymer möjligt. Sådana sjukdomar inkluderar: kolecystit, gallsten, parenkymal njur- och inflammatoriska sjukdomar i kroppen, njursvikt, prostatit, diabetisk ketoacidos, metastas av maligna tumörer i vävnader och organ (särskilt i lungorna, bukspottkörteln, tvärgående kolon). För misstänkt patologi som beskrivits ovan genomfördes en jämförande analys av total och pankreatiskt alfa-amylas, eftersom de sjukdomar som beskrivs allmänt ökar selivarnogo isoenzym-aktivitet (i cancer lesioner och prostatisk tvärgående tjocktarmen ökad aktivitet av både - P- och S-isoenzymer, som tillåter att skilja från inflammatoriska sjukdomar i samma organ).

Hyperamalasemi av icke-pankreatiskt ursprung uppträder också hos sjukdomar i spyttkörtlarna och vissa hjärnpatologier. I detta fall, öka den totala alfa-amylas aktivitet sker också genom att öka saliv isoenzym-aktivitet och differentiering av diagnosen bör utföras parallellt med mätning av totalt och pankreatiskt alfa-amylas (vid normal P-amylasaktivitet kan misstänkas patologi anges ovan).

Jämförande analys av alfa-amylasaktivitet i urin och serum är också en värdefull diagnostisk parameter vid bedömning av njurpatologin. I lesioner renal filterfunktion (för nefrotiskt syndrom, glomerulonefrit, etc.) Aktivitet av a-amylas i urin minskade markant, medan blod indikeras måttlig eller stor hyperamylasemia dock koefficienten "Amylas serum / amylas urin" är en huvudsakliga diagnostiska parametrar med denna patologi.

Postoperativa tillstånd (systemiskt inflammatoriskt reaktion på operation, utveckling av ARDS, etc.) kan också orsaka måttlig hyperamylasemi.

En minskning av alfa-amylasaktiviteten åtföljer vanligen en minskning av bukspottkörtelns funktionella aktivitet, orsakad av skador på organets parenchyma och / eller nedsatt exokrinreglering och uppträder oftast när:

Nekrotiska förändringar i bukspottkörteln i samband med hemorragisk pankreatit och total pankreatisk nekros.

Med leversjukdomar (hepatit, cirros). Maligna tumörer, speciellt vid levermetastas.

Allvarlig endokrin obalans: hypotyreoidism, diabetes mellitus, hyperlipemi (speciellt med ett överskott av triacylglycerider på grund av inhibering av enzymets aktiva centrum), med generell näringsstörning, kakexi och toxicos hos gravida kvinnor.

I vissa fall, med de ovan beskrivna patologierna, kan serumaktiviteten hos alfa-amylas inte minska, men förbli oförändrad.

De huvudsakliga relationerna i differentialdiagnosen av patologier med liknande symtom.

De vanligaste förhållandena är:

Total alfa-amylas / pankreatisk komponent. Används i differentialdiagnosen av inflammatoriska och maligna processer i bukorganen och några andra vävnader. Vid inflammatoriska processer, inte vidrör bukspottkörteln, är den primära källan för aktivitet av total alfa-amylasenzym selivarny, så att förhållandet "totalt amylas / pankreas isoform '> 1. i maligna lesioner av buken bidrag båda isoenzymerna är ungefär densamma, och nämnda förhållande är ungefär 1, 8-2,4. Med involvering av bukspottkörteln i den inflammatoriska processen eller i närvaro av tumörmetastaser i den, överskrider inte förhållandet mellan total och pankreatisk amylasaktivitet 1,5.

Totalt alfa-amylas / kreatinin i urin och serum. Det beräknade clearanceet används (formeln ges i punkt 3), medger differentiering av inflammatorisk process i bukspottkörteln (koefficienten överstiger 6%) och bukorganen (1-4%).

Totalt serum alfa-amylas / Totalt urin alfa-amylas. Används vid bedömning av njurfiltrets funktionella aktivitet. Vid nefrotiskt syndrom och glomerulonephritis är koefficienten högre än 2-2,5.

Totalt serum alfa-amylas / Serum triglycerider. Förhållandet är "invers", eftersom ett överskott av triacylglycerider kan hämma alfa-amylasaktiviteten. Det gör det möjligt att differentiera den patologiska minskningen i enzymproduktionen och störningen av hyperipmi.

Totalt serum alfa-amylas / bukspottkörtel lipas. Den biologiska och diagnostiska betydelsen av koefficienten är liknande den för föregående förhållande, eftersom närvaron av fria triacylglycerider i serum är direkt relaterad till aktiviteten av pankreatisk lipas. Andelen är direkt.

Förändringar i alfa-amylasaktivitet hos friska människor. Interferens med droger.

Aktiviteten av alfa-amylas i blodplasma hos friska människor beror väsentligt på kostens natur och de livsmedel som råder i kosten. Dessutom är denna parameter starkt beroende av intensiteten hos metaboliska processer i en viss individ, såväl som på ämnets hjärnaktivitet. Därför kan enzymets aktivitet i samma individ vid olika tidpunkter (även under samma dag) variera i intervallet 25-50% i båda riktningarna.

Hyperamylasemi hos friska människor kan orsakas av ett känslomässigt tillstånd (stress, ökad mental aktivitet), drickning (även en gång) av alkohol och är också förknippad med en kost rik på protein och utarmad i kolhydrater och sockerarter. Hypoamylasemi uppträder med en ökning av glukosutnyttjande, med fastande, aktiv träning, liksom hos personer med hyperlipidemi, även i avsaknad av kliniska manifestationer.

Under graviditet i upp till 19 veckor sänks alfa-amylasaktiviteten i jämförelse med normen, när det gäller upp till 33-34 veckors svaghet, ökar aktivitetsnivån och vid 37-40 veckor stabiliseras den på en nivå som är 10-20% högre än enzymaktiviteten hos friska, icke-gravida kvinnor.

På aktiviteten hos alfa-amylas och dess isozym pankreatisk betydande inflytande tillhandahåller även användningen av ett antal vanliga läkemedel konsumeras av friska personer i händelse av transienta infektionssjukdomar och inflammatoriska störningar - t ex tetracyklinantibiotika, furosemid, kortikosteroider, antiinflammatoriska läkemedel, salicylater.

En signifikant inverkan på alfa-amylasaktiviteten har också droger som leder till en minskning av Oddi sfinkter, inklusive hormoner (adrenalin, histamin, sekretin), narkotiska ämnen (morfin, pantopon, opium, codein) och andra läkemedel som ökar enzymets utsöndring och undertryck utflödet av utsöndring från bukspottkörteln.

Baserat på biofile.ru

Metodsprincipen: Maltotriosid associerad med kromogen 2-kloro-p-nitrofenol används som substrat för a-amylas. Under a-amylasverkan hydrolyseras substratet för att släppa färgad 2-klor-p-nitrofenol, maltotrios och glukos. Reaktionen fortskrider snabbt och kräver inte närvaro av koenzymer i reaktionsblandningen. Hastigheten för substrathydrolys är direkt proportionell mot a-amylasaktiviteten i provet och mäts spektrofotometriskt vid en våglängd av 405 nm.

Substrat-CNF ----> CNF + Glukos + Maltotrios

Linjäritet av metoden: upp till 1500 U / l.

a-amylas i icke hemolyserat serum förblir stabilt vid rumstemperatur (18-25 ° C) under 7 dagar vid en lagringstemperatur av 2-8 ° C under 2 månader.

1) En spektrofotometer med en temperaturstyrd kyvett, en våglängd av 405 nm, en optisk väglängd av 1 cm; reaktionstemperatur 37 ° C;

3) Automatiska pipetter för 25 μl och 1000 μl;

Spjälkvätska kan också användas som enzymkälla (spjälk späds tidigare med destillerat vatten 100 gånger), men intervallet av norm varierar kraftigt.

6) Arbetsreagens (substrat - 1,8 mmol / 1 i MES-buffert (pH 6,0 ± 0,1)).

Arbetsreagenset är lämpligt för användning om dess optiska densitet inte är högre än 0,6 enheter med optisk densitet. vid en våglängd av 405 nm och det finns ingen grumlighet.

Före analysen bör reagens värmas upp till mätningstemperaturen (37 ° C).

Rör om innehållet i röret och sätt på stoppuret. Mäta provets optiska densitet mot destillerat vatten i en längd av 405 nm på exakt 1 minut. Upprepa mätningen 3 gånger med ett intervall på 1 min. Beräkna förändringen i optisk densitet per minut och beräkna sedan den genomsnittliga mätningen av optisk densitet per minut (Dop / min).

Beräkningen av aktiviteten av a-amylasfaktor utförd av formeln:

där Dop / min är den genomsnittliga förändringen i optisk densitet per minut;

1,025 - den totala volymen av lösningen i kyvetten;

1000 är omvandlingsfaktorn ml till 1;

12,9 - millimolär absorptionskoefficient för 2-klor-p-nitrofenol;

0,025 är volymen av serum i ml;

1,0 är den optiska banlängden.

Vid ändringar i de angivna parametrarna ska faktorn omräknas. Om aktiviteten av a-amylas överskrider 1500 U / l (en punkt utanför linjäriteten för kalibreringsgrafen), ska det analyserade serumet spädas 1: 1 med en saltlösning och mätningen bör upprepas och resultatet av beräkningen multipliceras med 2.

Kliniskt och diagnostiskt värde: a-Amylas är ett endohydrolas och i människokroppen representeras av flera isoenzymer: enzymet utsöndras av spytkörtlarna (S-typ), bukspottkörteln (P-typ); liten enzymaktivitet finns i lever, skelettmuskler, tårvätska, utsöndring av bröstkörtlarna och olika tumörer.

Aktiviteten av a-amylas i serum ökar signifikant på grund av P-isoenzymet i olika sjukdomar i bukspottkörteln (pankreatit, abscess, trauma, cancer).

Med skador på spytkörtlarna (spottkörtelcancer, endemisk parotit, makroamylasemi) ökar också serum-a-amylasaktiviteten, men på bekostnad av S-isoenzymet.

Både a-amylasisoenzymer har en liten molekylvikt (45 000), så de filtreras i njurarna och utsöndras i urinen. En ökning av aktiviteten av urinamylas (diastas) vid akut pankreatit uppträder 6-10 timmar senare än i blodserum.

Baserat på biohimist.ru

Principen för metoden. Alfa-amylas katalyserar hydrolysen av ett olösligt färgat stärkelsubstrat för att bilda ett blått vattenlösligt färgämne. Mängden utsläppt färgämne är proportionellt mot enzymets aktivitet.

Förloppsförloppet. För att bestämma aktiviteten av alfa-amylas i serum eller urin bereds parallella experimentella och kontrollprover och analyseras i följande sekvens:

Proverna blandas, lämnas att stå i 15 minuter, centrifugeras vid 3000 rpm i 5 minuter. Därefter mäter den optiska densiteten hos försöksprovet mot kontrollen vid FEC vid en våglängd av 590 nm i kyvetter med en skikttjocklek av 5,0 mm.

Aktiviteten hos enzymet finns på kalibreringsschemat.

Kliniskt och diagnostiskt värde för bestämning av alfa-amylasaktivitet i serum och urin: hos människor utsöndras alfa-amylas av bukspottkörteln och spottkörtlarna, dess lilla aktivitet finns i levervävnad och skelettmuskler. Enzymets molekylvikt är relativt låg ("48 000), så det filtreras i njurarnas glomeruli och finns i urinen.

Hos friska människor är serumenzymaktiviteten från 140 till 350 U / l, i urin från 1000 till 2000 U / l. Amylasaktiviteten ökar, huvudsakligen i sjukdomar i bukspottkörteln (vid akut pankreatit). Sjukdomar i spytkörtlarna och kroniska njursjukdomar leder till en ökning av aktiviteten av serum-alfa-amylas.

Arbetsnummer 5. Effekten av adrenalin på glukos i blodet.

Framsteg av arbetet. I en kanin, från öratets marginalåra eller i en råtta från den kaudala venen uppsamlas 0,1 ml blod och blodglukosen bestäms med o-toluidinmetoden.

Därefter har djuret hårklippning på sin sida, gnuggar huden med alkohol och 0,1% lösning av adrenalin tas subkutant med en hastighet av 0,1 ml per 1 kg och efter 30 minuter mätes blodglukosen igen.

Arbetsnummer 6. Effekten av insulin på blodsocker.

Framsteg av arbetet. Från en annan kanin från öratets marginalåra eller från en råtta från den kaudala venen, ta 0,1 ml blod och bestäm glukoshalten i blodet.

I djuret skar pälsen på sin sida, behandla den med alkohol och injicera subkutant insulin med en hastighet på 1,5 internationella enheter per kg vikt. En timme senare bestämmer du blodsockret igen. Introducera djuret subkutant med 5% glukoslösning för att förhindra insulinchock: kanin 10 ml, råtta - 1 ml.

Resultaten från 3: e och 4: e arbetar till bordet och drar slutsatser.

Baserat på material www.ronl.ru

a - Amylas (diastas, 1,4-a-D-glukanhydrolas, EC 3.2.1.1.) katalyserar hydrolysen av a-1,4-glukosidbindningar av stärkelse, glykogen och deras besläktade polysackarider till maltos, dextriner och andra polymerer. Enzymets molekylmassa är ca 48 000 D. Molekylen innehåller en kalciumatom som inte bara aktiverar enzymet utan också skyddar den från proteasernas verkan, och amylasaktiviteten ökar med påverkan av klorjoner. I blodet representeras två isoenzymer: bukspottkörteln - P-typ och spytt - S-typ, som var och en är indelad i flera fraktioner. S-typen isoenzym är i allmänhet 45-70% (i genomsnitt 57%), resten är i P-typen. Båda isoenzymerna har nästan identiska katalytiska och immunologiska egenskaper, skiljer sig något i elektroforetisk rörlighet, men separeras väl genom gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Det finns också makroamylas, som inte utsöndras av njurarna, men kan hittas i normalt blodserum (cirka 1% friska människor) och patologi (2,5%).

Hög amylasaktivitet observeras i parotid och bukspottkörteln. Däremot finns dess aktivitet, även om den är mycket lägre, i stora och tunna tarmar, skelettmuskler, lever, njurar, lungor, äggledarrör, fettvävnad. I blodet är enzymet associerat med både plasmaproteiner och bildade element. Enzymaktiviteten är densamma för män och kvinnor och beror inte på vilken typ av mat som tas och tidpunkten för dagen.

Befintliga metoder för att studera a-amylasaktiviteten i biologiska vätskor är indelade i två stora grupper:

1. Sackariserande (reduktometrisk), baserat på studien av sockerarterna bildade av stärkelse genom den reducerande effekten av glukos och maltos.

2. Amyloklastisk, baserat på bestämning av resten av obruten stärkelse:

• enligt intensitetsgraden av dess reaktion med jod. Dessa metoder är mer känsliga och specifika, men deras noggrannhet beror till stor del på stärkelsens kvalitet och optimering av bestämningsförhållandena.
• viskositetssuspension av stärkelse, har inte hög noggrannhet och används inte nu.

3. Metoder som använder kromogena substrat - baseras på användningen av substrat-färgämneskomplex, vilka under a-amylasens verkan sönderdelas för att bilda ett vattenlösligt färgämne.

4. Metoder baserade på kopplade enzymatiska reaktioner:

Stärkelse + H₂Om Maltos + Maltotrios + Dextrin

Maltos + N₂Ca 2 Glukos

Glukos + ATP Glukos - 6 - F + ATP

Glukos-6-F + NADF-glukonat-6-F + NADFN

Aktiviteten hos enzymet bestäms av ackumuleringshastigheten för NADPH.

Två amyloklastiska metoder godkändes som förenade: Karavey (med resistent stärkelsubstrat) och Smith-Rohe.

a - Amylas katalyserar hydrolysen av ett olösligt färgat stärkelsubstrat för att bilda ett blått vattenlösligt färgämne. Mängden utsläppt färgämne är proportionellt mot enzymets katalytiska aktivitet.